ในทางเคมี การเจือจางเป็นกระบวนการในการลดความเข้มข้นของสารในสารละลาย การเจือจางแบบลูกโซ่คือการเจือจางซ้ำๆ ของสารละลายเพื่อเพิ่มปัจจัยการเจือจางอย่างรวดเร็ว ขั้นตอนนี้มักจะดำเนินการในการทดลองที่ต้องใช้สารละลายเจือจางมากและมีความแม่นยำสูง ตัวอย่างเช่น การทดลองที่เกี่ยวข้องกับเส้นโค้งความเข้มข้นในระดับลอการิทึมหรือการทดลองเพื่อกำหนดความหนาแน่นของแบคทีเรีย การเจือจางแบบลูกโซ่ใช้กันอย่างแพร่หลายในการทดลองทางวิทยาศาสตร์ เช่น ชีวเคมี จุลชีววิทยา เภสัชวิทยา และฟิสิกส์
ขั้นตอน
วิธีที่ 1 จาก 2: ทำการเจือจางพื้นฐาน
ขั้นตอนที่ 1 กำหนดสารละลายเจือจางที่เหมาะสม
สิ่งสำคัญคือต้องกำหนดของเหลวที่จะใช้สำหรับการเจือจาง สารละลายจำนวนมากสามารถละลายได้ในน้ำกลั่น แต่ก็ไม่เสมอไป หากคุณกำลังเจือจางแบคทีเรียหรือเซลล์อื่นๆ ให้ทำบนอาหารเลี้ยงเชื้อ ของเหลวที่คุณเลือกจะใช้สำหรับการเจือจางของสายโซ่ทั้งหมด
หากสงสัยว่าควรใช้สารเจือจางชนิดใด ขอความช่วยเหลือหรือดูทางออนไลน์ มองหาตัวอย่างจากคนอื่นๆ ที่เคยทำการเจือจางแบบลูกโซ่ที่คล้ายคลึงกัน
ขั้นตอนที่ 2 เตรียมหลอดทดลองจำนวนหนึ่งที่มีสารเจือจาง 9 มล
หลอดทดลองใช้สำหรับเจือจางเปล่า ขั้นแรก ใส่ตัวอย่างที่ไม่เจือปนลงในหลอดแรก จากนั้นทำการเจือจางตามลำดับไปยังหลอดถัดไป
- ติดฉลากหลอดทั้งหมดที่ใช้ก่อนเริ่มการเจือจาง เพื่อไม่ให้สับสนเมื่อทำการทดลอง
- แต่ละหลอดจะเติมด้วยการเจือจาง 10 ครั้ง โดยเริ่มจากหลอดที่สารไม่เจือจาง การเจือจางในหลอดแรกคือ 1:10 ตามด้วย 1:100 ในหลอดที่สอง 1:1000 สำหรับหลอดที่สาม และอื่นๆ กำหนดปริมาณการเจือจางที่ต้องทำล่วงหน้า เพื่อไม่ให้เสียสารละลายเจือจาง
ขั้นตอนที่ 3 เตรียมหลอดทดลองที่มีสารละลายไม่เจือปนอย่างน้อย 2 มล
ปริมาณสารละลายขั้นต่ำที่ต้องเจือจางเพื่อทำการเจือจางแบบสายโซ่นี้คือ 1 มล. หากคุณใช้เพียง 1 มล. จะไม่มีสารละลายที่ไม่เจือปนเหลืออยู่ ติดฉลาก BLM สำหรับโซลูชันที่ไม่เจือปน
ผสมสารละลายให้ละเอียดก่อนเริ่มเจือจาง
ขั้นตอนที่ 4 ทำการเจือจางครั้งแรก
ใช้ปิเปต 1 มล. ของสารละลายที่ไม่เจือปนจากหลอดทดลอง BLM แล้วใส่ลงในหลอดทดลองที่ติดฉลากว่า 1:10 ที่มีสารเจือจาง 9 มล. จากนั้นผสมให้ละเอียด ขณะนี้มีสารละลายที่ไม่เจือปน 1 มล. ใน 9 มล. ของตัวเจือจาง ดังนั้น สารละลายจึงถูกเจือจางด้วยปัจจัยการเจือจางที่ 10
ขั้นตอนที่ 5. ทำการเจือจางครั้งที่สอง
สำหรับการเจือจางครั้งที่สอง ให้ใช้สารละลาย 1 มล. จากหลอด 1:10 แล้วใส่ลงในหลอด 1:100 ซึ่งมีตัวเจือจาง 9 มล. ด้วย ตรวจสอบให้แน่ใจว่าสารละลายในหลอด 1:10 ผสมกันจนหมดก่อนที่จะใส่ลงในหลอดถัดไป อีกครั้ง ตรวจสอบให้แน่ใจว่าการเจือจางในหลอด 1:100 ผสมกันอย่างสมบูรณ์ สารละลายจากหลอด 1:10 ถูกเจือจาง 10 เท่าในหลอด 1:100
ขั้นตอนที่ 6 ทำต่อตามขั้นตอนนี้เพื่อทำการเจือจางสายโซ่ให้นานขึ้น
กระบวนการนี้สามารถทำซ้ำได้หลายครั้งตามความจำเป็นเพื่อให้ได้ความเข้มข้นของสารละลายที่ต้องการ ในการทดลองโดยใช้เส้นโค้งความเข้มข้น คุณสามารถทำการเจือจางแบบลูกโซ่เพื่อผลิตสารละลายจำนวนหนึ่งด้วยการเจือจาง 1, 1:10, 1:100, 1:1,000
วิธีที่ 2 จาก 2: การคำนวณปัจจัยการเจือจางและความเข้มข้นขั้นสุดท้าย
ขั้นตอนที่ 1 คำนวณอัตราส่วนของการเจือจางครั้งสุดท้ายในการเจือจางของสายโซ่
อัตราส่วนการเจือจางทั้งหมดสามารถกำหนดได้โดยการคูณปัจจัยการเจือจางจากแต่ละขั้นตอนจนถึงขั้นตอนสุดท้าย ภาพประกอบทางคณิตศาสตร์มีสูตร DNS = ด1 x ด2 x ด3 x … x ด , NSNS เป็นปัจจัยการเจือจางรวมและ D คืออัตราส่วนการเจือจาง
- ตัวอย่างเช่น สมมติว่าคุณทำการเจือจาง 1:10 4 ครั้ง เสียบตัวประกอบการเจือจางลงในสูตร: DNS = 10 x 10 x 10 x 10 = 10,000
- ปัจจัยเจือจางในหลอดที่สี่ในการเจือจางของสายโซ่นี้คือ 1:10,000 ความเข้มข้นของสารหลังการเจือจางต่ำกว่าก่อนเจือจาง 10,000 เท่า
ขั้นตอนที่ 2 กำหนดความเข้มข้นของสารละลายหลังจากการเจือจาง
ในการกำหนดความเข้มข้นสุดท้ายของสารละลายหลังจากการเจือจางแบบลูกโซ่ คุณต้องทราบความเข้มข้นเริ่มต้น สูตรคือ Cจบ = Cจุดเริ่มต้น/กระแสตรงจบ คือความเข้มข้นสุดท้ายของสารละลายเจือจาง Cจุดเริ่มต้น คือความเข้มข้นเริ่มต้นของสารละลายดั้งเดิม และ D คืออัตราส่วนการเจือจางที่กำหนดไว้ล่วงหน้า
- ตัวอย่างเช่น หากคุณเริ่มต้นด้วยสารละลายเซลล์ที่มีความเข้มข้น 1,000,000 เซลล์ต่อมิลลิลิตร และอัตราส่วนการเจือจางคือ 1,000 ความเข้มข้นสุดท้ายของตัวอย่างที่เจือจางคือเท่าใด
-
โดยใช้สูตร:
- คจบ = Cจุดเริ่มต้น/NS
- คจบ = 1.000.000/1.000
- คจบ = 1,000 เซลล์ต่อมล.
ขั้นตอนที่ 3 ตรวจสอบให้แน่ใจว่าทุกหน่วยเหมือนกัน
เมื่อทำการคำนวณใดๆ ตรวจสอบให้แน่ใจว่าหน่วยจะเหมือนกันเสมอเมื่อสิ้นสุดการคำนวณ ถ้าหน่วยเริ่มต้นคือเซลล์ต่อมิลลิลิตร ตรวจสอบให้แน่ใจว่าหน่วยยังคงเหมือนเดิมเมื่อสิ้นสุดการคำนวณ หากความเข้มข้นเริ่มต้นเป็นส่วนต่อล้าน (bpd) ความเข้มข้นสุดท้ายจะต้องอยู่ในหน่วย bpj ด้วย
